山东康德莱净化工程有限公司

山东康德莱净化更安全-PCR实验室净化方案

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辅料的质检通常是在新一批的辅料到实验室后统一做一次或者定期(半年或1年)做,因此质检就包含了验货和质检2个部分。由于辅料的质检没有一个统一的标准,一般由各实验室自行制定,可简可繁,这里提出一些方法供大家参考和批评指正。


1.外包装检查:外包装应完整无损无污,标识清楚,检查品名、品牌,货号,规格、生产日期,有效期、保存条件等信息。




2.内包装检查:内包装物品应与外包装标识一致,检查是否有破损,泄漏,内容物是否齐全,是否有相应的使用说明书等。


3.性能质检:检测试剂耗材是否与其性能一致,比如吸头的准确性和气密性等


4.污染物质检:检测试剂耗材是否被常规检测项目的待检物污染,这种污染可能是物品生产环节,也可能是运输或实验室的保存过程中被污染。


5.抑制物质检:检测试剂耗材中是否存在PCR反应的抑制物,比如核酸酶。









(1)渗漏密闭性:将n个PCR管加入半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。


(2)离心密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,放入离心机,1000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。


(3)热密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,盖好盖子称重后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,再进行称重,PCR管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。


(4)冷密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。


(5)污染物质检:将n个PCR管加入半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。


(6)抑制物质检:将n个PCR管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min,然后进行提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被抑制为合格。




(7)空白荧光通透性:对于qPCR,需要考察PCR管是否有非特异性荧光信号,将n个空PCR管,盖好盖子后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,qPCR无扩增为合格。


(8)阳性荧光通透性:对于qPCR,还需要考察PCR管是否会抑制荧光的通透性,将n个含弱阳性样品和扩增试剂的PCR管,与确认无荧光干扰的PCR管,盖好盖子后放入PCR仪一同扩增,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,qPCR扩增未被抑制为合格。

需要注意以下问题:


实验室使用的基因扩增仪,荧光定量PCR仪都是高精度仪器。一旦仪器出现一些温度或者检测上的小偏差,则很可能对实验结果产生较大的影响。因此,学会日常保养和维护是尤为重要的。


1、仪器安置


仪器应安放在湿度较低、灰尘较少并远离水源和热源的地方,无腐蚀性气体或强磁场干扰。


环境温度建议在18~35℃之间。仪器之间应保持50cm 以上距离,降低仪器之间的影响。


2、样品台、热盖定期清洁


用95%乙醇配合棉签、无尘布等工具,清洁样品台。之后运行PCR仪,设定保持温度为50℃,约5~10min,让残余液体挥发去除。另外,热盖也应该用酒精或纯水定期清洗,确保热盖清洁,温控性能良好。对于荧光定量PCR,清洁样品台和热盖的同时,去除灰尘等杂物,保证光路清洁,降低信号干扰。


3. 使用前预热


老款的PCR仪的性能比不上新款仪器,使用前需要进行预热,不仅对仪器维护有好处,还能节约实验时间。新款的仪器升温快,但还是建议能在进行实验前预热2min,这样可以有效延长仪器的使用寿命。


4. 定期运行维护


1.PCR仪器需要定期检测,视制冷方式而定一般半年至少一次。


2.PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的,当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1~2℃时,可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。




3.PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制,要求越短越好,当PCR仪的降温过程超过60s,就应该检查仪器的制冷系统,对风冷制冷的PCR仪要较地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。


4.一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时,不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件,必要时要请人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。